英文名称:TDT;Terminal
Transferase;Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
其他名称:末端脱氧核苷酸转移酶;胸腺五肽
CAS号:9027-67-2
分子量:60000
级别:BR
浓度:20u/ul
活性定义:是指在37℃、60分钟内将1nmol脱氧核糖核酸掺入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,简称TdT,中文名称为末端脱氧核糖核酸转移酶,是一种非模板依赖的DNA聚合酶,可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3'羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短长度为3个核苷酸。有报道TdT也可以在RNA的3'羟基端加上NTP,但对于RNA的催化活性要弱于DNA。
用途:寡核苷酸或DNA 3'羟基末端标记;DNA末端加尾(DNA tailing);5'-RACE;合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。
来源:由大肠杆菌表达,表达基因的来源为小牛胸腺。
活性定义:37℃ 60分钟内,催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3'羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件:200mM potassium cacodylate (pH7.2), 1mM CoCl2,0.1mM DTT, 0.01% (v/v) Triton X-100, 10μM
oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNase。
酶储存溶液:100mM KAc (pH6.8), 2mM 2-mercaptoethanol, 0.01% (v/v) Triton X-100 and 50% (v/v) glycerol。
Reaction Buffer (5X):0.125M Tris (pH7.2 at 25℃), 1M potassium cacodylate, 0.05% (v/v) Triton X-100, 5mM
CoCl2。
失活或抑制:70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金属离子螯合剂,较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
性状(以下信息仅供参考):悬浮液,重组酶。末端转移酶(Terminal transferase, TdT)是一种无需模板的DNA聚合酶,催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3'羟基端。带有突出、凹陷或平滑末端的单双链DNA分子均可作为TdT的底物。一般操作是:先在载体上打开一单个位点,把它与末端转移酶和某一dNTP(如dATP)一起保温以使添尾,另一待插入的外源DNA片段则用互补的用同法添dNTP(dTTP)用同法添尾。接着使上述两种都接上互补单链尾的DNA片段彼此退火,使形成一杂合载体来转化受体菌。杂合载体中的裂隙或切口可被受全菌所修复。
用途:本品仅供科研,不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)催化DNA的3'末端添加同聚物;DNA的3'末端标记
保存:-20°C